關(guān)鍵字：2009年，腎臟病學(xué)分會(huì)，大連年會(huì)

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簡(jiǎn)介： A32? PI3K/AKT通路在12/15-脂氧化酶引起的系膜細(xì)胞病變中的作用研究
目的：通過(guò)觀察12/15-脂氧化酶（12/15-LO）代謝產(chǎn)物12(S)-HETE對(duì)PI3K-AKT-Foxo3a信號(hào)傳導(dǎo)通路的活化作用，探討12/15-LO對(duì)MnSOD、Bim基因表達(dá)調(diào)控的作用，對(duì)細(xì)胞凋亡與氧化應(yīng)激的影響以及對(duì)TGF-?-Smad信號(hào)途徑的影響機(jī)制，揭示其參與糖尿病腎臟病理改變的發(fā)生機(jī)制。方法：本實(shí)驗(yàn)選用腎小球系膜細(xì)胞為研究對(duì)象，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選擇雄性SD大鼠，應(yīng)用腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，65mg/kg）的方法誘導(dǎo)1型糖尿病模型。將12(S)-HETE（10-7M）加入培養(yǎng)液中刺激不同時(shí)間，利用蛋白印跡雜交（western blot）法檢測(cè)AKT、Foxo3a蛋白和磷酸化水平；利用競(jìng)爭(zhēng)性定量PCR法檢測(cè)MnSOD、Bim、FN、collagen等基因的表達(dá)水平。利用免疫熒光技術(shù)觀察12(S)-HETE 對(duì)Foxo3a細(xì)胞核內(nèi)遷移的影響；同時(shí)通過(guò)免疫組化技術(shù)對(duì)照觀察糖尿病與非糖尿病大鼠腎臟內(nèi)磷酸化的Smad、AKT、Foxo3a蛋白的分布情況。將提取的總DNA進(jìn)行凝膠電泳，觀察細(xì)胞凋亡的變化。