關(guān)鍵字：中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)，2015年，學(xué)術(shù)年會(huì)，壁報(bào)交流

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簡介： Twist-Bmi-1 通過調(diào)控 PI3K/Akt 通路促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化
段夢露
第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院 710032
目的：腎臟纖維化是各類慢性腎臟病發(fā)展至終末期的共同病理表現(xiàn)，但其病理機(jī)制尚不完全清楚。前期研究已證實(shí) Twist 是促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵分子，但其具體分子機(jī)制不明。因此，本論文旨在探討 Twist 促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化的具體分子機(jī)制。
方法：利用轉(zhuǎn)錄因子活性譜芯片技術(shù)對(duì) 108 例 CKD 患者腎組織進(jìn)行篩選，獲得 CKD 患者腎組織和對(duì)照腎組織中差異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，選擇顯著高表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測：該轉(zhuǎn)錄因子啟動(dòng)子區(qū)是否存在 Twist 潛在的結(jié)合位點(diǎn) E-box 序列(CANNTG)。進(jìn)一步報(bào)告基因和 ChIP 實(shí)驗(yàn)篩選出能被 Twist 直接轉(zhuǎn)錄激活的轉(zhuǎn)錄因子。構(gòu)建該轉(zhuǎn)錄因子的正義及反義質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染 HK-2 細(xì)胞并缺氧處理 48h 或 50mmol/ L 右旋葡萄糖刺激 48h， qRT- PCR、 Western blotting、免疫組化和免疫熒光方法檢測 PI3K/Akt 的表達(dá)水平及促纖維化因子 TGF-β、 α-SMA、 FN、 COL1A1、 COL3A1 的表達(dá)。構(gòu)建小鼠 UUO 腎間質(zhì)纖維化模型，分別腹腔注射抑制或增強(qiáng)該轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的慢病毒載體， HE 和Masson 染色方法檢測間質(zhì)纖維化程度； qRT- PCR、 Western blotting、免疫組化和免疫熒光方法檢測 PI3K/Akt 的表達(dá)及促纖維化因子 TGF-β、 α-SMA、 FN、 COL1A1、 COL3A1 的表達(dá)水平。