關(guān)鍵字：APOL1蛋白，mRNA，腎，非軟骨組織，原代細(xì)胞，永生細(xì)胞系

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簡介： 摘要
雖然APOL1基因變異與非洲裔美國人的腎病有關(guān)，但對APOL1蛋白的合成，攝取和腎細(xì)胞定位知之甚少。為了解決這些問題，我們檢測了人腎和人腎來源細(xì)胞系中的APOL1蛋白和mRNA定位。間接免疫熒光顯微鏡對來自腎功能正常人的非患病腎切除術(shù)冷凍切片進(jìn)行，顯示APOL1蛋白在足細(xì)胞中顯著富集（與synaptopodin和Wilms'腫瘤抑制因子共定位），并且在腎小管細(xì)胞中存在較低的豐度。熒光原位雜交檢測腎小球（足細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞）和腎小管中的APOL1 mRNA，與這些細(xì)胞類型中的內(nèi)源性合成一致。當(dāng)這些分析擴(kuò)展到腎源細(xì)胞系時，定量RT-PCR未檢測到人腎小球系膜細(xì)胞中的APOL1 mRNA;然而，在近端小管細(xì)胞和腎小球內(nèi)皮細(xì)胞中觀察到大量APOL1 mRNA，足細(xì)胞.Western印跡分析揭示了這些細(xì)胞系中相應(yīng)水平的APOL1蛋白。為了解釋在冷凍切片中觀察到的腎足細(xì)胞中標(biāo)記的豐富的APOL1蛋白與足細(xì)胞系中較少豐度之間的明顯差異，我們探索了APOL1細(xì)胞攝取。 APOL1蛋白在體外容易被人足細(xì)胞攝取，但不被腎小球系膜細(xì)胞，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞或近端小管細(xì)胞有效攝取。我們假設(shè)人冷凍切片足細(xì)胞中較高水平的APOL1蛋白可能反映內(nèi)源性蛋白質(zhì)合成和來自循環(huán)或腎小球?yàn)V液的APOL1攝取。